杂交瘤技术的原理是使免疫的小鼠脾细胞与具有体外长期繁殖能力的小鼠骨髓瘤细胞融为一体,成为杂交瘤细胞,最终获得既能产生所需单克隆抗体,又能长期繁殖的杂交瘤细胞系。
将这种杂交瘤细胞扩大培养,接种于小鼠腹腔,在小鼠腹腔积液中即可得到高效价的单克隆抗体。
包括两种亲本细胞的选择与制备,细胞融合,杂交瘤细胞的筛选与克隆化
该细胞是次黄嘌呤磷酸核酸核糖转化酶(HGPRT)的缺陷株
免疫用抗原尽量提高其纯度和活性,免疫途径多用腹腔内或皮内多点注射法
PEG(聚乙二醇)可能导致细胞膜上脂类物质的物理结构重排,使细胞膜容易打开而有助于细胞融合。
HAT培养液,是在基础细胞培养液内添加次黄嘌呤、甲氨蝶呤和胸腺嘧啶核苷
因缺乏HGPRT而合成DNA,骨髓瘤细胞在HAT培养基中不能增殖而死亡
由骨髓瘤细胞和脾细胞融合形成的杂交瘤细胞
由于与脾细胞融合,可获得其HGPRT,可以合成DNA。因此,杂交瘤细胞在选择性培养得以生存而被筛选出来